2.磁颗粒化学发光免疫测定Р第一节发光与化学发光剂Р一、发光一种物质由电子激发态回复到基态时,? 释放出的能量表现为光的发射。Р1.光照发光:发光剂经短波长入射光照射后进入激? 发态,当回复至基态时发出较长波长的可见光。Р2.生物发光:反应底物在荧光素酶的催化下利用? ATP产能,生成激发态的氧化荧光素,后者在回? 复到基态时多余的能量以光子形式放出。Р3.化学发光:在常温下由化学反应产生的光的发射。? 化学发光是一个多步骤的过程。Р荧光素酶?ATP;O2;Mg2+Р氧化萤火虫荧光素Р萤火虫荧光素Р生物发光Р返回Р光+ AMP+ O2 + CO2 +Р①能参与化学发光反应;? ②与抗原或抗体偶联后形成稳定的结合物试剂;? ③偶联后仍保留高的量子效应和反应动力;? ④应不改变或极少改变被标记物的理化特性,? 特别是免疫活性。Р化学发光剂应符合以下几个条件Р返回Р1.酶促反应的发光底物Р是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物。? CLEIA中常用的酶有HRP和AP? HRP的发光底物有鲁米诺、对-羟基苯乙酸? AP的发光底物有AMPPD、4-MUP(荧光底物)? 特点:可作标记物、也可作过氧化物酶的底物Р1.1 鲁米诺РH2O2 /OH —? HRPР+N2 + H2O +光Р对-羟基苯乙酸(HPA)РHPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体(荧光? 物质),在350nm激发光作用下,发出450nm波长? 的荧光,可用荧光光度计测量。Р1.2 HPAРH2O2?HRPР+荧? 光Р氧化二聚体РAMPPDРAMPPD在碱性条件下,被AP酶解生成相当稳定的? AMP-D阴离子,其有2~30min的分解半衰期,发? 出波长为470nm的持续性光,在15min时其强度? 达到高峰,15~60min内光强度保持相对稳定。Р光РAP /OH —Р HPO4 2—Р1.3 AMPPD
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