细胞因子检测方法Р基础医学院微免学系王慧娟Р背景Р细胞因子检测是判断机体免疫功能的一个重要指标?疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测等Р(一)依赖性细胞株:生物分析法?(二)功能检测:生物分析法?(三)免疫测定:免疫分析法?(四)功能测定与抗体抑制?(五)分子杂交技术:mRNA的测定?(六)多聚酶链反应技术(PCR):mRNA的测定Р生物分析法Р(一)依赖性细胞株Р一些肿瘤细胞株必须依赖于细胞因子方能在体外增殖,如DTLL细胞株依赖IL-2;FDC-PL细胞株依赖于小鼠IL-3;TF-1细胞株依赖于人IL-3和人GM-CSF,因而可利用这些依赖细胞株检测相应的细胞因子。这种方法敏感性高,特异性也不错,但可异的是并非所有细胞因都能找到相应的细胞株,因而限制了它的应用。Р(二)功能检测Р利用一些细胞因子的功能特性,可建立相应的活性测定方法,如干扰素的抑制病毒感染效应,肿瘤坏死因子对L929细胞的杀伤作用等。这样的方法敏感性高,但特异性不够,容易受一些扰因素的影响。Р免疫分析法Р(1)放免实验(RIA)?(2)酶联免疫吸附实验(ELISA)Р小结Р生物学检测法比较敏感,又可直接测定生物学功能,是最可靠的方法,适用于各种实验目的,是科研部门最常用的技术,但需要长期培养依赖性细胞株,检测耗时长,步骤繁杂,影响因素多,不容易熟练掌握。?免疫学检测法比较简单,迅速,重复性好,但所测定的只代表相应细胞因子的量而不代表活性,同时敏感度也低于生物活性检测法(约低10~100倍)。?分子生物学法只能检测基因表达情况,不能直接提供有关因子的浓度及活性等资料,主要用于机制探讨。Р影响因素Р原理与方法?灵敏度?准确度和特异性?精密度:免疫分析法的精密度较其生物分析法有较大提高;批内变异通常为20%~25%,因此有必要进行2次或3次检测?标准化?生物分析法和免疫分析法结合使用
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