实验一细胞计数与活力测定Р实验目的Р1、学习、掌握细胞培养中最基本的细胞计数方法。?2、学会血球计数板的使用方法。Р原理Р培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。? 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞一般也要检查活力,以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力,了解冻存和复苏的效果。? 用台盼兰染细胞,由于活细胞的细胞膜完整,染料无法渗入,活细胞不着色,死细胞着色,从而可以区分死细胞与活细胞。计算细胞活力:活细胞数/(活细胞+死细胞)*100%。Р四个角落的正方形深度为0.1mm,盖上盖玻片后体积为1mm × 1mm × 0.1mm=1.0 × 10-4mL。Р1.00 mmР1.00 mmР1.00 mmР1Р2Р4Р3Р细胞数目/ml=4大格细胞总数/ 4×稀释倍数×104Р实验方法Р1、将血球计数板及盖片用擦试干净,并将盖片盖在计数板上。?2、将细胞悬液以0.5ml加入试管中,加入0.5ml 0.4%台盼兰染液,染色2-3分钟。?3、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。?4、静置3分钟。?5、镜下观察,分别读出计数板四大格中死细胞数和活细胞数,计算细胞数目和细胞活力。Р注意事项Р1 若细胞位于线上,只计左侧和上方的(或右侧和下方的)。? 2 计数板计数时,最适浓度为5~10*105个/mL,此范围外计数误差偏大,需要重新稀释。? 3 计数应在台盼蓝染色数分钟内完成,随时间延长,部分活细胞也开始摄取染料、因为台盼蓝对蛋白质有很强的亲和力,用不含血清的稀释液,可以使染色计数更准确。
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