免疫共沉淀PPT课件

免疫共沉淀技术Р汇报人:马云霞(20121902040)?组成员:戴亮亮(20121902017)?冯永芬(20121902019)?尚亚宁(20121902015)Р免疫共沉淀?技术Р定义及原理Р操作过程Р注意事项Р优点和不足Р应用及实例Р展望Р定义及基本原理Р免疫共沉淀定义? 免疫共沉淀技术(Co-Immunoprecipitation,CO-IP)(也称免疫共吸附或免疫下拉技术),能够从原始的细胞裂解物中分离并富集目标蛋白。它是利用抗原和抗体特异性结合以及细菌的 ProteinA/G 特异地结合到免疫蛋白 Fc片段的现象开发出来的方法。? Co-IP是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础来研究蛋白质相互作用的经典方法。也是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。Р基本原理? 在细胞裂解液中加入抗目的蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于 sepharose beads 上的 proteinA/G,与细胞中的目的蛋白结合,就形成一种复合物:目的蛋白/目的蛋白-抗目的蛋白抗体-protein A/G,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,复合物被分开。最后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。Р原理流程图解Р实验室常用的琼脂糖?基质的 Protein A/G ?产品可用于免疫?共沉淀。Р实验流程如图所示Р具体步骤和方法(实验室)Р获取细胞(107_108)---加细胞裂解液-------离心--取上清加抗体--免疫沉淀反应------裂解液洗涤3/4次---离心弃上清液---加SDS缓冲液(煮沸5-10min)---离心---上清液进行SDS-PAGE---Western Blot或质谱分析РCO-IP操作过程示意图Р关键因素?1. 抗原的丰度?2. 抗体的结合能力?3. 蛋白质和抗体的?可接触性