CT GA 5'p AGCT TCGA 酶切后平末端酶切后粘性末端 DNA 纯度、缓冲液、温度条件及限制性内切酶本身都会影响限制性内切酶的活性。大部分限制性内切酶不受 RNA 或单链 DNA 的影响。当微量的污染物进入限制性内切酶贮存液中时,会影响其进一步使用,因此在吸取限制性内切酶时,每次都要用新的吸管头。如果采用两种限制性内切酶,必须要注意分别提供各自的最适盐浓度。若两者可用同一缓冲液,则可同时水解。若需要不同的盐浓度,则低盐浓度的限制性内切酶必须首先使用,随后调节盐浓度, 再用高盐浓度的限制性内切酶水解。也可在第一个酶切反应完成后,用等体积酚/氯仿抽提,加 0.1 倍体积 3mol/L NaAc 和2倍体积无水乙醇,混匀后置-70 ℃低温冰箱 30分钟,离心、干燥并重新溶于缓冲液后进行第二个酶切反应。酶切过程中的注意事项在酶切过程中,为了获得条带清晰的电泳图谱,一般 DNA 用量约为 0.5-1 μg。限制性内切酶的酶解反应最适条件各不相同,各种酶有其相应的酶切缓冲液和最适反应温度(大多数为 37℃)。对质粒 DNA 酶切反应而言, 限制性内切酶用量可按标准体系 1μ g DNA 加1单位酶,消化 1-2 小时。但要完全酶解则必须增加酶的用量, 一般增加 2-3 倍,甚至更多,反应时间也要适当延长。酶切过程中的注意事项 DNA 限制性内切酶酶切图谱又称 DNA 的物理图谱,它由一系列位置确定的多种限制性内切酶酶切位点组成,以直线或环状图式表示。在 DNA 序列分析、基因组的功能图谱绘制、 DNA 的无性繁殖、基因文库的构建等工作中,建立限制性内切酶图谱都是不可缺少的环节,近年来发展起来的限制性片段长度多态性( RFLP) 技术更是建立在它的基础之上。技术应用 DNA 限制性内切酶酶切图谱目标 DNA 片段分析基因工程中外源 DNA 与载体的连接目标 DNA 片段分析
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