第七章 重组子的筛选与鉴定

vector BamHI BamHI DNA ligase + binaton plasmid Transformats grow in Transformats grow in the presence of both the presence of Amp Tet and Amp but not Tet 2. 转化率?转化菌中有一部分是重组子,还有非重组子。?重组子中存在非目的重组子。转化子重组子目的重组子?由于重组率和转化率不可能达到理想极限, 因此必须借助各种筛选和鉴定方法区分转化子与非转化子、重组子与非重组子、目的重组子与非目的重组子。重组子的筛选与鉴定山东理工大学生命科学学院张建勇《基因工程原理》“选择”( selection )和“筛选”( screening )的基本含义?选择,是指通过某种外来附加压力(或因素) 的辨别作用,呈现具有重组 DNA 分子的特定克隆类型的一种方法。包括根据克隆载体提供的表型特征的简单选择, 和根据突变的互补作用对克隆基因的直接选择。?筛选则是指通过某种特定的方法,从被分析的细胞群体或基因文库中,鉴定出真正具有所需重组 DNA 分子的特定克隆的过程。第七章重组子的筛选与鉴定?一、遗传检测法?二、物理检测法?三、杂交检测法?四、免疫化学检测法确定外源 DNA 片段是否插入并与载体连接。一、遗传检测法?1.根据载体表型特征选择重组体分子?2.根据插入序列表型特征选择重组体分子 1.根据载体表型特征选择重组体分子?载体分子,都带有一个可选择的遗传标记或表型特征。根据载体分子的遗传特征进行选择,是获得重组体 DNA 分子细胞群体的必不可少的条件之一。?(1) 抗生素抗性基因插入失活选择法?(2) β-半乳糖苷酶显色反应选择法