列已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA 或 RNA) 。 FISH 针分析的基本原理?两条不同来源的核酸单链如果在一定区段具有互补的碱基序列,或者说具有一定的同源性,就可以特异性结合,形成双链杂种分子,这种结合称为核酸分子杂交。?如果用已知核酸(通常是 DNA) 片段作为探针,通过与未知核酸(DNA 或RNA) 样品进行杂交试验,根据两者杂交状况的分析,就可以确定它们同源性程度, 检测特定核苷酸序列在样品中的存在及含量。这便是核酸探针分析的基本原理。交技术的分类?根据其检测对象不同,可分为检测对象探针 Southern 杂交 DNA 核酸 Northern 杂交 RNA 核酸 Western 杂交蛋白质抗体?根据探针来源的不同,可分为来源基因组探针( genomic probe ) 基因组 cDNA 探针( cDNA probe ) mRNA 寡核苷酸探针( Oligonucleotides Probe ) 人工合成作程序印迹( blotting ) 将样品在凝胶上分离,然后将样品通过“影印”的方式转移到固相支持物上(如滤膜)。杂交将已印迹有样品的滤膜与带有放射性标记或其它标记的探针进行杂交。结果检测通过放射自显影或显色反应,判断样品中是否有与探针同源的分子。 thern 杂交检测样品 DNA 的处理电泳分离及变性处理转移并固定到滤膜上探针的制备及杂交检测与分析品 DNA 的处理?提取检测样品的基因组 DNA ?用限制性内切酶对其进行酶切,至大小不同的 DNA 片段离及变性处理?琼脂糖凝胶电泳分离 DNA 片段?变性处理?通常 DNA 变性的方法:热变性、酸碱变性、化学试剂变性?在 0.4M NaOH 碱性条件下变性凝胶 0.4M NaOH 固定到滤膜上?通过毛细管虹吸法,将凝胶上的 DNA 转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上。最后通过紫外线照射将 DNA 固定在滤膜上。
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