小时后,切块放入脱水机中脱水,后在包埋机中石蜡封埋成块。2.将蜡块切成4um组织片,58℃烘片12小时。3.常规脱蜡至水:将载玻片浸入二甲苯I、II、III各10分钟,无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇各5分钟,蒸馏水洗30秒钟。4.用3%的过氧化氢封闭30分钟。5.水洗5分钟,PBS缓冲液浸泡5分钟。6.抗原修复:在抗原修复盒中加入0.01M枸橼酸钠缓冲液,将玻片浸入,加热到98℃持续20分钟,后自然冷却至室温。7.PBS缓冲液洗5分钟×3次。8.在玻片组织片上滴加羊封闭血清,放入湿盒于37℃恒温箱中放置20分钟。9.倾去封闭血清,小心拭去组织片周围液体,后滴加一抗(兔抗人P75NTR、兔抗人CD133、鼠抗人α-SMA)1:50,覆盖组织片。4℃冰箱,过夜。磷酸盐代替一抗,作为阴性对照。10.取出玻片,放置室温下。11.PBS缓冲液洗5分钟×3次。12.滴加二抗工作液,覆盖组织片,放入湿盒于37℃恒温箱中放置30分钟。13.PBS缓冲液洗5分钟×3次。14.滴加SABC工作液,放入湿盒于37℃恒温箱中放置30分钟。15.PBS缓冲液洗5分钟×3次。16.滴加DAB显色液避光10分钟。17.水洗中止反应。18.滴加苏木素复染核1分钟。19.水洗使组织返蓝。20.脱水,将载玻片依次浸入75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、二甲苯III、II、I各2分钟。21.晾干,封片剂封片。二、免疫荧光1.将免疫组化制作的蜡块切成4um组织片,58℃烘片12小时。2.常规脱蜡至水:将载玻片浸入二甲苯I、II、III各10分钟,无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇各5分钟,蒸馏水洗30秒钟。3.水洗5分钟,PBS缓冲液浸泡5分钟。4.抗原修复:在抗原修复盒中加入0.01M枸橼酸钠缓冲液,将玻片浸入,加热到98℃持续20分钟,后自然冷却至室温。5.PBS缓冲液洗5分钟×3次。
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