清洗的用途。因为经不起多次 “折磨 ”。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径，通常 20KD以上的大分子蛋白用РРР0.45um 孔径的膜，小于?20KD的话建议选择РРР0.2um 的，如果小于 7KD 的话最好选择РРР0.1um 的膜。另外还要注意选择纯的 NC膜混有含醋酸纤维 (CM)的 NC 膜结合力会有所降低。РРР⑶ 、由于 NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替，因此在封闭时最好使用较温和的 Tween20，而且浓度不要超过РРР0.3%(据说РРР0.05%效果最好 )。一般而言， NC膜越纯，其蛋白结合能力就越高，所以要增加 WB 的灵敏度和分辨率，提高所使用膜的纯度是个可以考虑的选择。如果РРNC 膜搀杂一些醋化纤维素这在前面已经提到，会影响蛋白质结合 ⑷、与硝酸纤维素膜相比， PVDF膜在蛋白质截留能力，机械强度和化学相容性上都更优越的性能。市售硝酸纤维素膜的典型结合量是 80-100μg/cm2,而 PVDF膜结合量是РРРРРР2 / 3РРРРРР100-200μ g/cm2(而结合强度 PVDF比硝纤膜强 6 倍！ )。但是 PVDF膜最大的优点不仅于此：РРР更好的机械强度和化学耐受性使?PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中РР成为理想选择；而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的，特别是需要做 N 端蛋白测序，在相当 “严酷 ”的清洗条件下，当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色，所以 PVDF也是要做蛋白测序的唯一选择。但不适合荧光。 PVDF膜特别注意的是需要 100%甲醇预处理 (不超过 15 秒)再用缓冲液平衡，才能用。РРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРРР3 / 3
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