4℃预变性2min,1个循环;94℃变性1min,60℃复性30s,72℃延伸45s,10个循环,每个循环复性温度降低0.5℃;94℃变性1min,55℃复性30s,72℃延伸45s,30个循环;4℃保存。也可将复性温度按照各SSR引物的最佳复性温度设为定值,则无须采用梯度复性程序。PCR扩增完成后,可采用6%变性聚丙烯酰胺凝胶或2.5-3.0克/100毫升琼脂糖胶电泳,通过扩增带分子量大小不同而在凝胶上对应不同迁移距离的条带,从而检测分析抽取样本的条带一致性,有1个样本具有差异条带(相对原始品种条带缺失或增加条带)则计变异率1%,有多个样本具有差异条带则变异率依样本个数累加。5.8 健康种苗生产用种繁殖通过组织培养获得的瓶苗由于受激素等因素影响,种茎小、生长势弱、糖分低,不能直接推广用于大田生产,必须进行1-3代的繁殖恢复品种的优良种性。繁殖一级健康种苗生产用种宜在非蔗区进行,方圆2公里范围内宜无甘蔗(含糖蔗与果蔗),方圆200米内应无禾本科作物种植;宜选择有大山、丘陵或树林等自然环境隔离的山谷、平原等,前2茬应未种植过禾本科作物。繁殖二级健康种苗生产用种宜在非蔗区进行,方圆1公里范围内宜无甘蔗(含糖蔗与果蔗),方圆100米内应无禾本科作物种植;宜选择有大山、丘陵或树林等自然环境隔离的山谷、平原等,前1茬应未种植过禾本科作物。繁殖三级健康种苗生产用种宜在非蔗区进行,方圆500米范围内宜无甘蔗(含糖蔗与果蔗),方圆50米内应无禾本科作物种植;宜选择有大山、丘陵或树林等自然环境隔离的山谷、平原等,前1茬应未种植过禾本科作物。一至三级健康种苗生产按标准NY/T1796-2009甘蔗种茎生产技术规程执行。5.9 甘蔗健康种苗质量标准甘蔗脱毒瓶苗和袋栽苗、甘蔗脱毒种茎质量标准按NY/T1796-2009甘蔗种苗执行。_________________________________
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