法与色素法相结合的合方法,简便快捷,灵敏度高,稳定性好,是一种较好的蛋白质常用分析方法。Р5. (10 分) 简述福林一酚试剂法测定碱性蛋白酶活力的原理Р福林一酚试剂是磷怕酸盐与磷钨酸盐的混合物。它在碱性条件下不稳定,能被酪氨酸屮的酚基还原,生成铂蓝、钨蓝的浞合物。酪蛋Q在蛋Q酶作用后产生的酪氨酸可与福林一酚试剂反应,所生成的蓝色化合物可用比色法测定。Р6、?(15分)在糖酵解中间产物鉴定实验巾,各管内颜色有何不同?哪一管最后生成的颜色最深?为什么?如果2号、3号试管颜色差别不明显?试分析其原因。РB管颜色最深,因为管屮所加的碘乙酸是三磷酸甘汕醛脱氢酶的抑制剂,会阻断Р糖酵解的正常进行,累积三磷酸甘汕醛。Р八管颜色最浅,因为三氯醋酸是酶的变性剂,它使体系中的酶变性失去催化活性,Р体系中几乎没有糖酵解反应发生,也就不会有三磷酸油醛。РC管颜色介于A管和B管之间,因为管中所加的除葡萄糖和酵母外仅有硫酸肼,Р硫酸肼不会对酶的活性有影响,只是三磷酸甘汕醛的稳定剂,但不会对酶促反应Р的正常进行产生抑制或失活作用。Р2号、3号试管颜色差别不明S,保温时间不够。Р7. (15分)简述离子交换层析分离氨基酸混合物的方法是根据氨基酸的什么性质? 如果选用阴离子交换树脂,并将实验所用缓冲液的pH值选择为6.5,分析在此条件下天冬氨酸和赖氨酸的分离结果?(天冬氨酸的等电点为2.77,赖氨酸的等电点为9.74)Р离子交换层析利用氨基酸是两性物质,在一定pH下不同氨基酸带电性质和Р带电量不同,因此交换能力不同。Р年级:07级?生物工程等(本科)?课程号:S14030104Р天冬氨酸的等电点小于6. 5,带负电荷。赖氨酸等电点大于6. 5,将带正电荷。因此在实验条件下,赖氨酸不能与阴离子交换树脂发生结合,直接流出树脂柱, 天冬氨酸与树脂发生可逆的结合洗脱过程而后流出树脂柱,从而两种氨基酸被有效分离开。
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