效应,使膜表面沉积的硫酸软骨素浓度降低,从而提高杂质的透过率。Р4.5.4 色谱法Р离子交换色谱法是依靠库仑力的作用将物质吸附在交换剂上,然后选用适合的洗脱剂进行洗脱,达到其纯化的目的。常用于硫酸软骨素纯化的阴离子交换剂有树脂、纤维素和葡聚糖凝胶等。Р4.5.5 电泳法Р采用双向电泳法纯化硫酸软骨素,第一相电泳条件为pH 6.0的吡啶/醋酸/水(10∶1∶89,v/v)缓冲液,电场强度7.5 V/cm,电泳60 min;第二相电泳条件为pH 7.7的醋酸钡缓冲液,电场强度为7.5 V/cm,电泳130 min,得到纯度为82 %的硫酸软骨素[17]。Nicola V采用琼脂糖凝胶电泳(50 mm×70 mm,4 mm~5 mm厚),电泳条件为0.05 mol/L的1,2-二氨基丙烷缓冲液(醋酸调pH至9.0),电流为50 mA,电泳80 min,可得到纯度为90 %的硫酸软骨素,但其回收率仅为45 %[18]。Nicola V采用硝化纤维素膜电泳(60 mm×100 mm,孔径0.45 mm),加样量为1.0 mg~10.0 mg,电泳条件为0.1 mol/L的醋酸钡缓冲液,泳动度为5.75×10-3 cm/A·min,电泳40 min,可得到纯度为100 %的硫酸软骨素,其回收率也为100 %。Р5.硫酸软骨素常用的分析方法Р硫酸软骨素常用的分析方法有比色法,质量法,定氮法[11]Р5.1比色法:Р比色法是根据Elson-Morgan反应进行。用此反应测定分子组成中的2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖和2-氨基-2-脱氧-D-半乳糖,包括用碱性乙酰丙酮处理生成的几个生色基团与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,以分光光度法测定吸收值,同时用氨基己糖制备标准曲线,操作时,先用HCL水解硫酸软骨素生产氨基己糖,在碱性条件下与乙酰丙酮反应,在与对二甲氨基苯甲醛缩合,生成红色化合物。
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