物与免疫学实验指导,三峡大学医学院生物病原学部编。Р3、医学免疫学实验指导,主编:张秋萍,武汉大学出版社。Р教学内容及时间分配:Р一、讨论设计方案 30分钟Р二、总结方案及讲解五种免疫标记技术 15分钟Р方案归纳:Р1、人体免疫包括细胞免疫和体液免疫。本次实验从T细胞分泌的细胞因子着手检测细胞免疫功能。Р2、确定研究对象,给药途径,剂量,样本量。给药后检测血清中细胞因子的含量。Р3、因为体内细胞因子含量低,故选取免疫标记技术检测细胞因子的含量。Р五种免疫标记技术:Р1、免疫荧光技术:Р2、放射免疫分析法:Р3、酶联免疫分析法Р4、化学发光免疫分析法Р5、金标记技术Р三、酶联免疫吸附试验的原理及操作步骤(双抗体夹心法) 30分钟Р原理:Р1.抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;Р2.抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;Р3.酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。Р 操作步骤Р1.抗体包被Р2.封闭:用10%小牛血清或奶粉0.1毫升封闭,37℃孵育20分钟,洗涤3次。Р3.加待测标本Р于每孔内分别加不同稀释度(如1:5,1:10,1:20…1:80)的待测血清,PBS空白对照,阴性对照血清,阳性对照血清各0.1毫升。37℃孵育30分钟,洗涤3次。Р4.加酶标抗体Р于每孔加酶标抗体各0.1毫升,37℃孵育1小时,洗涤3次。Р5.加临时配制的底物溶液各0.1毫升,置暗处37℃孵育10分钟。加2M硫酸1滴终止反应,5分钟内检查结果。Р6. 结果判断:肉眼观察:Р7.用酶标仪检测:Р四、酶联免疫吸附试验(操作) 100分钟
全文预览
