梯度混合装置制成,主要用于测定球蛋白类组分的相对分子质量。Р (4)、SDS-凝胶电泳:采用SDS-凝胶为支持体的电泳称为SDS-凝胶电泳,主要用于蛋白质相对分子质量的测定。Р简述不连续凝胶电泳的原理Р答:不连续凝胶电泳的凝胶由样品胶、浓缩胶和分离胶三层组成,其中样品胶处于凝胶系统最上层的大孔径凝胶,在PH6.7~6.8的Tris-HCl缓冲液中聚合而成,含有欲分离的样品,有时可以不用这层样品胶,而直接将样品与10%的甘油或5%~20%的蔗糖混合后,加到浓缩胶的表面。浓缩胶在PH6.7~6.8的Tris-HCl缓冲液中聚合而成的大孔凝胶,除了不含样品外,其他与样品胶相同,样品中的各组分就在浓缩胶中浓缩,按照迁移率的不同,在浓缩胶和分离胶的界面上压缩成层。分离胶在pH8.8~8.9的Tris-HCl缓冲液聚合而成的小孔径凝胶,凝胶的孔径根据欲分离组分的大小通过丙烯酰胺的浓度进行调节,样品中各组分在分离胶中进行分离。Р 在酶或其他蛋白质、核酸等进行不连续凝胶电泳时,采用阴离子电泳系统(采用pH8~9的电极缓冲液,组分带负电荷)。将制备好的多层凝胶置于电泳系统中,用pH8.3的Tris-甘氨酸缓冲液作为电极缓冲液进行电泳,样品中各组分在浓缩胶中浓缩成狭窄的高浓度样品层。这是由于在各层凝胶中都含有HCl,HCl的离解度大,几乎全部成为Cl-,Cl-在电场中移动速度最快,称为快离子;在电泳槽中含有甘氨酸,在样品胶和浓缩胶中pH为6.7~6.8,甘氨酸只有0.1%~1%离解为负离子,在电场中移动速度最慢,称为慢离子;而蛋白质或核酸的移动速度介乎快离子和慢离子之间。接通电源电泳开始后,Cl-快速移动,走在最前面,在其后面形成一个离子浓度较低的低电导区,低电导产生较高的电位梯度,这种电位梯度促使蛋白质等组分和慢离子在快离子后面加速移动,致使蛋白质等组分在快、慢离子之间浓缩成一狭窄的中间层。
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