肉及肉制品中猪牛羊马驴鸡鸭鹅兔源性成分的快速鉴定 实时PCR法 编制说明

度РFP浓度Р50 nMР300 nMР500 nMР900 nMР50 nMР300 nMР500 nMР900 nMР扩增结束后选取具有最小Ct值、最强荧光信号及最佳扩增曲线的引物浓度对进行下步试验。Р4.2探针浓度优化Р为了使特定浓度探针,在浓度优化的引物对下,能产生最强的荧光信号、最佳的扩增曲线,对探针浓度进行优化,按如下体系进行摸索:Р探针浓度梯度:50 nM-125 nM-200 nM-250 nMР扩增结束后选取具有最小Ct值、最强荧光信号及最佳扩增曲线的引物浓度对进行下步试验。Р4.3 DNA模板量与Ct值线性关系试验Р以以上确定的最佳浓度引物、探针,按如下浓度梯度对模板DNA进行倍比稀释,作为反应模板进行扩增反应,确定各检测体系最适量的模板DNA,并以确定模板DNA浓度范围与Ct值线性关系。Р模板DNA梯度浓度:10-3 ng/μL、10-2 ng/μL、10-1 ng/μL、100 ng/μL、101 ng/μL、102 ng/μLР5.确证实验Р对以上建立起的方法进行特异性与灵敏度试验。Р5.1 特异性验证Р对以上建立的检测体系,分别以猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅、兔的基因组DNA为模板,进行扩增检测,以评价各检测体系的特异性。验证试验除模板DNA按照下表进行外,其他参数按照已经优化的条件进行:Р表3 特异性验证试验模板DNA设置Р检测体系Р模板DNAР猪源性成分检测体系Р 猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅、兔Р牛源性成分检测体系Р 猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅、兔Р羊源性成分检测体系Р 猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅、兔Р马源性成分检测体系Р 猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅、兔Р驴源性成分检测体系Р 猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅、兔Р鸡源性成分检测体系Р 猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅、兔Р鸭源性成分检测体系Р 猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅、兔