0。Р 3、加抗原Р 将 0. 5 m L抗原(1:20)加入已稀释好的各血清管中,并振摇均匀,猪、羊或狗的血清稀释则依次变为1 : 25,1 : 50,1 : 100,1:200,牛、马和骆驼的血清稀释度则依Р 次变为1:50,1:100,1:200,1:400。各反应管反应总量为1 mL。 4、设立对照--每次试验都应设立下列对照。Р ①阴性血清对照Р 阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清同Р ②阳性血清对照Р 阳性血清的最高稀释度应超过其效价滴度,加抗原的方法与被检血清同。③抗原对照Р 在0. 5mL稀释液中,加0.5 m L抗原(1:20)Р 5、比浊管的配置Р 每次试验均须配制比浊管,作为判定凝集反应程度的依据,先将抗原(1: 2 0)用等量稀释液作一倍稀释,然后按表1配制比浊管。Р 6、感作Р 所有试验管充分震荡后,置37℃温箱感作20-22h取出后室温2h。Р 7、结果判断Р 确定每份被检血清效价:比照比浊管判读,出现++以上凝集现象的最高血清稀释度为血清凝集价。Р ①结果判定Р 当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集(一),阳性血清的凝集价达到其标准效价士1个滴度,则证明试验成立,可以判定。否则,试验应重做。Р ②牛、马和骆驼于1:10。血清稀释度,猪、山羊、绵羊和狗于1:50血清稀释度出现“++”以上的凝集现象时,被检血清判定为阳性反应。Р 三、试验后的处理Р 1、试管的处理Р 把所用试管必须高压处理(121℃高压30分钟),然后用自来水彻底洗涮干净,再用去离子水冲洗,后放置框中沥干,干燥(160℃干燥3个小时),保存备用。Р 2、配置好而未用完的抗原及其盛装其瓶子的处理Р 瓶子连其抗原一同高压灭菌(121℃高压30分钟),后清洗干净以备用。Р 3、试管架的处理Р 把试管架上带有样品标记的符号用无水乙醇彻底清除掉,后用自来水把试管架冲洗干净,晾干、保存备用。
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