杂着核酸,提纯核酸时混杂着蛋白质或多糖,一般可用专一性酶水解、有机溶剂抽提、选择性分部沉淀等方法处理,小分子物质常在整个制备过程中多次液相与固相互相转化被分离或最后用透析方法除去。Р 而对同类物质,如酶和杂蛋白,RNA和DNA以及不同结构的蛋白质、酶、核酸之间的分离,情况则复杂得多,主要应用的方法有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、吸附法、结晶法、电泳法、超速离心法、柱层析法等。其中盐析法、等电点法、结晶法用于蛋白、酶的提纯较多;有机溶剂抽提和沉淀用于核酸提纯较多;柱层析法、梯度离心法在蛋白质和核酸的提纯工作中应用均十分广泛。Р 3.总结Р 盐析法由于具有:a、成本低,不需要特别昂贵的设备;b、操作简单、安全;c、不会引起蛋白质变性,经透析去盐后,能得到保持生物活性的纯化蛋白质的优点,使得盐析法在生物分离纯化中得到广泛的运用。盐析沉淀法不仅是蛋白质初级纯化的常用手段,在某些情况下,盐析沉淀法也可用于蛋白质的高度纯化。对于杂质含量较高的料液,可利用反复盐析沉淀并结合其他沉淀法,制备纯度较高的酶制剂。当然,盐析法也有不足之处,他就是分辨率不够高,利用盐析沉淀初级纯化的产物中盐含量较高,一般在盐析沉淀后,需进行脱盐处理,才能进行后续的纯化操作。除盐的方法有超滤、透析、凝胶过滤,将沉淀重新溶解后再用有机溶剂沉淀,树脂除盐。Р 参考文献:Р [1]俞俊棠.生化分离工程.北京:化学工业出版社,2001;Р [2]欧阳平凯.生物分离原理及技术.北京:化学工业出版社,1999;Р [3]储炬,李友荣.现代生物工艺学.上海:华东理工大学出版社,2007,P287-291;Р [4]日本生物工学会编.刘彬,曾祯,李馨译.生物工程.北京:科学出版社,2008,Р P435;Р [5]俞俊棠,唐孝宣,邬行彦,李友荣,金青萍.新编生物学工艺学(下册).北Р 京:化学工业出版社,2003,P37。
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