苷酸序列,并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶,有三种类型,Ⅰ类,Ⅱ类,Ⅲ类,他们都有甲基化修饰功能和限制酶功能,Ⅱ类常用于分子克隆Р 20.粘性,平Р 21.CР 22.实验课见黑板上Р 23,--G --写在上面,下面为--CCTAG G-- 该酶为限制性内切酶IР 24,AР 25:DР 26:1.确定合适的量程,不可超过量程取液。2.取液时按到第一档,Tip头垂直进入液面3-5毫米取液。移液器注意不能接触溶液。3.打出液体时贴壁并有一定角度,要按到第二档将液体全部压出。4.使用完毕后,打下tip头,放好移液器。Р 27. 分别是0.1-2.5 ,0.1-2.5 ,1-10, 2.5-20, 10-200, 100-1000。 28,氯化铷法,甘油—聚乙二醇法,一步法Р 29题.因为质粒pETBlue-2带有青霉素抗性基因,所以转化成功的大肠杆菌细胞能在含羧苄青霉素的琼脂糖平板上生长形成菌落.所以用含羧苄青霉素的琼脂糖平板可以筛选出转化成功的大肠杆菌.Р 30.见实验指导92面的实验原理的后半部分!Р 31.用水打湿的毛巾,着火时用毛巾盖上就行了Р 32.(1)卫星菌落是氨苄降解后生长的杂菌。可能是感受态细胞的问题也可能是转化过程出现操作失误例如未在冰中进行转化,感受态在常温下放置过久失活,转化后摇菌时间过短,或者摇床速度过慢,没有把菌摇起来,如果不是转化Р 过程出现的问题就要进一步考虑连接是否正确,连接时间12~16h,体系一般6ul-10ul,目的片段:载体一般1:3~1:10.(2)可以将培养时间控制在12h-16h之间,或者更换抗生素为羧苄青霉素Р 33:影响因素有(1)大肠杆菌生长状态(2)氯化钙浓度(3)冰上放置时间(4)保存温度Р 34题、第一问:温育就是让感受态恢复一下状态,以及一些相关抗性基因的表达。毕竟从-70℃环境中取出,需一段时间适应才可转化。
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