术介绍及比较:Р 质谱分析法(mass spectrometry)Р 该方法利用质谱分析对质量的灵敏度特别高的特点,很容易将仅含有一个不同碱基的两段基因序列区别开的特点,使用质谱直接或间接检测等位基因特异性延伸区的反应产物,推导出SNP。单碱基延伸或其修饰形式与基质辅助激光吸收/离子飞行时间(MALDI-TOF)质谱结合已被广泛的应用,并已被美国公司(Sequenom)发展为商业性产品。我公司提供的SNP检测技术服务,就是基于这样的方法。Р DNA芯片技术(DNA chip)Р 将已知序列的寡核苷酸DNA排列在1块集成电路板上,将荧光标记的正常DNA和突变DNA发别与2块DNA芯片杂交,由于至少存在1个碱基的差异,正常和突变的DNA将会得到不同的杂交图谱,经过共聚集显微镜检测两种DNA分子产生的荧光信号,确定是否存在突变。限制性片段长度多态性分析法(RFLP)Р RFLP技术利用限制性核酸内切酶识别并剪切特定DNA序列的能力,检测基因片段上限制性核酸内切酶识别位点处是否存在核苷酸突变。应用限制性内切酶对两个等位基因识别的差异Р,产生不同大小的切割片段,通过电泳迁移率的不同来判定是否存在SNP。Р 实时荧光PCR分析法Р 使用针对核酸中不同多态性序列的荧光Taqman探针,它们在PCR扩增中被水解释放荧光信号,只有与靶序列完全匹配的探针才能被相应的切割。不同探针标记不同的荧光报道信号。利用多通道荧光PCR仪检测结果,可以便捷判断核酸多态性。Р 单链构象多态性分析法(SSCP)Р 在非变性聚丙烯酰胺凝胶上,短的单链DNA和RNA分子依其大碱基序列不同而形成不同构Р 象,一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。Р DNA测序法(DNA sequencing)Р 双脱氧终止法,引物用四种不同前颜色的荧光标记,使每个样品的四个测序反应可在一个反应管和一个泳道内进行。
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