附试验(ELISA),它是用酶标记抗体或酶标记抗抗体进行的抗原抗体反应。Р(1)标本采集和处理病人无需空腹,通过无菌性静脉穿刺采集自凝血样本2ml,离心后留取血清,最好是新鲜血清用于测定,如不能立即测定可保存于-20℃,不能反复冻融。溶血、高脂血症、黄疸可能影响检测结果。Р(2)检测原理酶联免疫吸附试验(ELISA)是根据酶免疫测定原理发展的一种固相免疫酶技术,目前广泛应用于各种抗原和抗体的检测。ELISA的基本原理是:①抗原和抗体能与固相载体表面结合并保持其免疫活性;②抗原和抗体与酶结合成的标记物,既能保持抗原或抗体的免疫活性,又能保持酶的活性;③受检物中的抗原或抗体与固相表面的抗体或抗原发生免疫反应并结合在固相表面,此抗原抗体复合物又能结合相应的酶标记物,Р用洗涤方法除去未结合而游离的酶标记物,继而加入酶反应的底物后,底物被酶催化为有色产物,显色的程度与受检物中的抗原或抗体的量直接相关,用合适的分光光度计或酶标仪进行比色,根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,一般1分子酶在1min内可催化数十万乃至上千万分子底物变为产物,故可极大地放大反应结果,从而使测定方法具有很高的敏感度。Р我们实验室检测抗体的具体步骤是:先将已知的可溶性抗原吸附于某一种固相载体表面,并保持其免疫活性。加入待检血清,患者血清与固相载体表面的抗原接触起反应,如血清中有相应特异性抗体存在,则抗体会与抗原结合在固相载体上,形成抗原—抗体复合物,洗涤去除过多的抗体。然后加入用辣根过氧化物酶标记的抗体复合物,后者将会与抗原—抗体复合物结合。Р通过洗涤,洗去未反应的酶标记抗体,这样结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物四甲基联苯胺(TMB)后,底物经酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,用酶标仪进行比色,根据颜色反应的深浅进行定性分析。
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