性(SDS、异硫氰酸胍等);③高盐洗涤;④蛋白酶处理(2)多糖的去除:①高盐法:用乙醇沉淀时,在待沉淀溶液中加入1/2体积的5MNaCl,高盐可溶解多糖;②用多糖水解酶将多糖降解;③在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积),氯苯可以与多糖的羟基作用,从而去除多糖;④用PEG8000代替乙醇沉淀DNA:在500μLDNA液中加入200μl20%PEG8000(含1.2MNaCl),冰浴20min。(3)多酚的去除:①在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂:β-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等;②加入易与酚类结合的试剂:如PVP、PEG(聚乙二醇),它们与酚类有较强的亲和力,可防止酚类与DNA的结合(4)盐离子的去除:70%的乙醇洗涤18.蛋白质分离纯化的总目标增加制品的纯度或比活,以增加单位蛋白质重量中靶蛋白的含量或生物学活性(比活常以活力单位数/毫克蛋白质表示),即从蛋白混合物中设法去除不要的杂蛋白和变性的靶蛋白,使靶蛋白的产量达到最高值。19.举例说明蛋白质的分离纯化方法盐析法:将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液,使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏,导致蛋白质沉淀。等电点沉淀法:净电荷为零,分子之间的静电排斥力最小,因而容易聚集形成沉淀。该法适用于在等电点pH稳定的蛋白质。有机溶剂沉淀法:甲醇、乙醇、丙酮等(保持低温),破坏蛋白质的水化层,使蛋白质的溶解度降低而沉淀。20.凝胶过滤层析的机理凝胶色谱的机理是分子筛效应,在洗脱过程中,大分子不能进入凝胶内部,而沿凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外;而小分子可以进入凝胶颗粒内部的多孔网状结构,路径长、流速慢,以至最后流出柱外。因此,混合样品如同“过筛”一样,因分子大小的不同得以彼此分开。22.简述载体的分类。(1)克隆载体:能将载体外源DNA在受体细胞中复制、扩增并产生足够量目的DNA的载体。包括质粒载体、噬菌体载体
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