自来水冲洗干净,放置在小木板上,用利刀切成2-3cm/段,每段至少一个侧芽,无菌条件下用70%酒精表面消毒30-40s,再用0.1%HgCl2溶液灭菌5-10min,最后用无菌水冲洗3-5次。外植体的清洗与消毒优选*接种操作的程序:1.接种室的消毒2.器皿器具灭菌3.材料的分离、切取和接种垂直接种和斜向上45度接种是最佳的接种方式,腋芽再生芽数较多,且生长健壮,可能与植物的生长极性有关。接种与培养优选*接种过程中的污染:1.细菌性污染主要症状:培养材料附近出现粘液状和发酵泡沫状物体。接种三五天可发现。原因:外植体带菌、培养基灭菌不彻底、操作手法不当。2.真菌性污染:一般是指霉菌引起的污染原因:接种室内的空气不清洁、超净工作台的过滤效果不理想。优选*诱导培养基以MS为基本培养基(硝酸盐、钾和铵的含量高),附加适量的细胞分裂素6-卞氨基嘌呤(6-BA)0.5-3.0mg/L和生长素萘乙酸(NAA)0.01-1.0mg/L,且培养基中添加蔗糖有增加丛生芽数量的作用。优选*优选*壮苗培养与生根1、壮苗培养在继代培养过程中,细胞分裂素浓度的增加有助于增殖系数的提高。但伴随着增殖系数的提高,增殖的芽往往出现生长势减弱,不定芽短小、细弱,无法进行生根培养的现象;即使能够生根,移栽成活率也不高,必须经过壮苗培养。壮苗培养时,可将生长较好的芽分成单株培养,而将一些尚未成型的芽分成几个芽丛培养。通过选择适宜的细胞分裂素和生长素的种类及不同浓度配比,可以同时满足增殖和壮苗的不同要求。高浓度的生长素和低浓度的细胞分裂素的组合有利于形成壮苗。因此,在以丛生芽方式进行增殖时,适当降低培养基中BA等细胞分裂素的浓度,并增加NAA等生长素的浓度,就能达到壮苗培养的目的。在实际生产中,我们一般用较低浓度的细胞分裂素与生长素组成合理的比列,将有效增殖系数控制在3.0-5.0,以实现增殖和壮苗的双重目的。优选*
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