素母液,加入培养基中。Р用精密试纸或PH计调整pH至6.0。用配制好的0.1mol/L的HCl和0.1mol/L的NaOH溶液来调节pH值。Р稍微冷却后,分装入以洗净的三角培养瓶中。再用布塞和牛皮纸封口,最后用绳子扎紧。Р另取适量滤纸(多张/组)、培养皿(2套/组),用牛皮纸包好扎紧;另取去离子水适量装入盐水瓶,盖好塞子;另取小镊子和刀等包好(2套/组)。Р将步骤7、8所准备的物品统一放入高压锅内,120KPa灭菌30min左右。灭菌后从灭菌锅中取出培养基,平放在实验台上令其冷却凝固,放入超净台备用。在开始操作前将所用器材放入超净台,打开紫外灯进行消毒。Р3.2兰州百合外植体灭菌处理和初代培养Р将买来的新鲜兰州百合的鳞茎拨开,洗去上面的泥土,在用流动的自来水冲洗2h,用前再用蒸馏水洗1-2遍放到4度冰箱保存待用。在超净工作台上采用75%的酒精溶液侵泡90s,去离子水水冲洗3次,然后用3%NaClO3溶液浸泡15min,用去离子水冲洗3次,进行外植体消毒处理。然后放在无菌滤纸上,用无菌刀切成Р0.5cm大小的小块,凹面向上,接种于培养基上。每人接种1瓶,每瓶接种3块外植体。培养条件: 25℃、湿度80%、光照8h/d、光照强度2000lx。每5天向培养箱中加一次水,每隔两天进行观察和记录生长情况,一周左右鳞片的颜色会发生变化,由刚开始的白色慢慢有点变紫色,培养10天左右鳞片由淡绿色慢慢变为绿色。Р四、实验结果及讨论Р4.1实验结果Р图1:5月20日,第4天,生长正常,边缘变成浅黑色Р图2、3:5月23日,第7天,无染菌现象,黑色边缘加深,表面有紫色纹路Р图4:5月27日,第11天,表面紫色加深,有绿色出现Р图5:5月30日,第14天,表面绿色加深,无染菌现象Р图6:6月3日,第18天,和上次相比没有太大变化,无染菌现象Р图7:6月6日,第21天,无太大变化,此时边缘变为深黑色
全文预览
