实验十九、纸色谱实验二十、氨基酸的纸上电泳一、目的与要求:1、了解纸色谱的基本原理。2、学习用纸色谱法分离氨基酸的一般操作。3、了解电泳的基本原理,学会纸上电泳的操作方法。4、初步掌握用纸上电泳法分离鉴定氨基酸。二、基本原理(一)纸色谱是一种分配色谱。滤纸作为载体,纸纤维上吸附的水为固定相,与水不相混溶的有机溶剂作为流动相。当样品点在滤纸的一端,使流动相从有样品的一端上行,通过毛细管作用,流向另一端时,依靠溶质在两相间的分配系数不同而达到分离。极性大的组分在固定相中分配得多,随流动相移动速度慢,极性小的在流动相中分配得多,随流动相移动速度快一些。三、纸色谱实验步骤(观看录像)1、点样;2、展开;3、显色与结果处理——计算出两个物质的Rf值。(二)在一定的条件下,带电的质点在电场作用下,向着与其所带电荷相反的电极移动,这种现象称为电泳。不同氨基酸在同一pH值的溶液中,所带的电荷不同。在同一电场中,带不同电荷的各个氨基酸泳动的方向和速度不相同,因此将不同的氨基酸在同溶液中进行电泳时,由于各个氨基酸移动的方向和距离都不相同,从而达到分离鉴定的目的。四、纸上电泳实验步骤(观看录像)1、点样与润湿;2、电泳;3、显色;4、结果处理——标明正、负极和氨基?酸。氨基酸的纸上电泳图谱实验注意事项:1、整个实验都不应用手直接接触滤纸(手汗中有氨基酸);2、纸色谱点样点越小越好(点2次即可),纸上电泳点样点越小越好(可重复点4-5次);3、点完样后,毛细管应放回原试管中,不可放错;4、电泳实验中,当全部滤纸都放入电泳槽后才可以通电;5、电泳结束应先关电源再把滤纸取出?(电压较高,注意安全);6、纸色谱中的显色剂已经加入到展开剂中,不用另外喷,直接吹干即可显色;7、纸上电泳实验所喷水合茚三酮不能太多,并且注意茚三酮不可喷到皮肤上。
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