体积排阻色谱与光散射技术 SECMALS 课件

AngleLightScattering(多角度光散射)SEC-MALS:多角度光散射与体积排阻法联用技术什么是SEC-MALS?体积排阻色谱传统SEC假设弊端Sizeexclusionchromatographyofnativeandreduced,carboxymethylatedRnaseAdaptedfrom“Size-exclusionchromatographywithon-linelight-scattering,absorbance,andrefractiveindexdetectorsforstudyingproteinsandtheirinteractions”byJ.Wen,etal.,Anal.Biochem.240155–166(1996).传统SEC假设待测样与标样性质相似:构象相似;密度相似;与柱填料无任何相互作用。高分子表征的需要BSALSRIMwDextranLSRIMw多分散性样品:Mn,Mw,Mz,PDI(Mw/Mn)单分散性样品:检测,识别聚集体以及各组分的数量。典型光散射与色谱联用配置对于水相体系,建议使用0.1µm对流动相过滤;而对于有机相体系,建议使用0.2µm对流动相过滤;使用在线脱气装置(In-linedegasser);添加在线过滤器(In-linemembranefilter):水相体系:PEEK材质在线过滤器;有机相体系:不锈钢材质在线过滤器;逐步增加或降低流速,切不可大幅度调整流速;SEC-MALS测定法几点建议*以上建议有助于延长泵、柱子的寿命(即使不使用光散射仪)。摩尔质量-定义Numberaveragemolarmass:Weightaveragemolarmass:Z-averagemolarmass:色谱洗脱曲线中,每一洗脱体积其摩尔质量由光散射仪测定。色谱洗脱曲线中,每一洗脱体积其浓度由浓度型检测器测定。