NASBA检测新技术简介

NASBA检测技术简介快速灵敏特异自动化背景什么是NASBA?核酸依赖性扩增(Nuclearacidsequence-basedamplification,NASBA)检测技术是一项以RNA为模板进行等温核酸扩增并能实时观测结果的检测方法,该技术的检测反应有赖于AMV逆转录酶、噬菌体T7RNA多聚酶、核糖核酸酶H、两种特别设计的特异性寡核苷酸引物和分子信标探针共同协作而完成。酶混合物(EnzymeCocktail)逆转录酶核糖核酸酶HT7RNA聚合酶逆转录酶:AMV鸟骨髓细胞瘤病毒逆转录酶(AvianMyeloblastosisVirusReverseTranscriptase,AMVRT),其具有以RNA,DNA或者RNA/DNA为模板合成DNA的功能。核糖核酸酶H(RNaseH):RNaseH(RibonucleaseH)能够特异性降解DNA/RNA杂合子中RNA的磷酸二酯键,从而使DNA/RNA杂合子中的RNA降解。T7RNA聚合酶T7RNA聚合酶是一种以DNA为模板合成RNA的聚合酶,其只有在有特异性的启动子序列存在的情况下才能发挥作用。引物和探针引物1(P1):用于靶基因(正义?RNA)的特异性的反转录。其5’端带有一段T7启动子序列.引物2(P2):用于靶基因(反义?RNA)的特异性的反转录。探针:一种分子信标探针,其使检测结果能过被实时观察。FQGQF分子信标探针作用原理MolecularbeaconDNAprobeNASBARNAIsothermalamplificationHybridization促灭基团荧光基团LoopStem带有颈环结构两端被修饰(荧光基团和荧光促灭基团)的双链DNA探针特异性检测序列(loop)长度为20-25bp6-7bp颈部(stem)互补序列针对不同的靶基因可以使用不同的荧光标记GQF什么是分子信标探针?