---(限制)? ? 4. 由于降解不完全,外来少数DNA分子在宿主细胞中繁殖过程中被宿主细胞的甲基化酶修饰,虽然是外来却不被降解。? ?5.但丧失在原宿主细胞中的存活能力,因为接受了新宿主菌甲基化修饰的同时丧失了原宿主菌修饰的标记(一但入-K 噬菌体在 B 株成功,由 B 株繁殖出入-K 后代,能感染 B 株, 不能感染原来 K株.)Р6.细菌利用限制和修饰系统来区分自身DNA与外来DNA。C株不能产生限制性内切酶,其它来源入- 噬菌体可以感染C株,而在 C株繁殖入- 噬菌体则在 K株和 B 株受到严格的限制作用?三.限制性内切酶的分类:(三大类)?I. I类, II类, III类.?2. I类,III类为限制---修饰酶。? 限制性内切活性和甲基化活性,都作为亚基的功能单位包含在同一酶分子中。?3 . II类限制性内切酶与甲基化酶是分离的,切割位点专一,适合于DNA重组。Р四.原核细胞中限制和修饰系统Р四.原核细胞中限制和修饰系统Р I类酶 II类酶 III类酶? 酶分子三亚基双功能内切酶与甲基化酶分离二亚基双能? ?识别位点二分非对称序列 4-6bp序列,回文结构 5-7bp非对称序列? ?切割位点距识别位点1000bp 在识别位点中或靠识别位点在识别位点? 下游24-26bpР限制性反应互斥分开反应同时竟争?与甲基化反应Р限制作用需要ATP 需要需要不需要Р五.I类酶,III类酶限制-修饰酶基本特怔? ?1)I类酶,EcoK,EcoB。?(1)异源多聚体,亚基R.M.S分别具有限制,修饰酶的作用,特异性位点识别活性。Р(2)I类酶与 DNA识别位点结合依赖亚基 M与辅助因子S—腺苷甲硫氨酸(SAM)相互作用。Р(3)S—腺苷甲硫氨酸(SAM)通过变构作用使酶处于活性状态,酶与 DNA识别位点结合后,根据甲基化状态发挥相应酶的活性,或限制, 或限修饰,或不限制不限修饰
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