酸与碱性蛋白的结合)、氢键和非极性的范德华力。分离核酸最困难的是将与核酸紧密结合的蛋白质分开,同时避免核酸降解。?核蛋白有核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白两种,针对所提核酸的种类,要选择合适的方法。Р2017/7/3Р南京农业大学生命科学学院Р8Р核蛋白的解聚、变性蛋白的去除?常用方法:?加入浓盐溶液(如NaCl)。核酸-蛋白质加入NaCl后,破坏静电吸力,使氢键破坏,核蛋白解聚;常选用0.14mol/L的氯化钠溶液提取RNP,而选用1mol/L的氯化钠溶液提取DNP。Р加入SDS。SDS除有破胞和抑制核酸酶的作用外,还具有使核酸从蛋白质上游离出来的功能;?酚/氯仿抽提。酚/氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果,并对核酸酶有抑制作用。氯仿比重大,能加速有机相与水相分层,减少残留在水相中的酚,同时氯仿具有去除植物色素和蔗糖的作用。可加上一定量的异戊醇可防止起泡和促使水相与有机相的分离(酚:氯:异戊醉=25:24:1)。Р2017/7/3Р南京农业大学生命科学学院Р9Р核蛋白Р0.14mol/LNaClР1.0mol/LNaClРRNPР溶解度大Р溶解度小РDNPР溶解度小(仅为水中1%)Р溶解度大(比在水中大2倍)Р核酸的沉淀浓缩?核酸和蛋白质分离后,经离心后溶液分为三层:上中下分别是核酸溶液、变性蛋白质凝胶和氯仿。接下来要浓缩核酸,沉淀是浓缩核酸最常用的方法。沉淀的具体方法见第二章。?优点:改变核酸的溶解缓冲液;重新调整核酸的浓度;去除溶液中某些盐离子与杂质。?一般强调,核酸沉淀在低温长时间下进行。低温长时间沉淀,易导致盐与DNA共沉淀,影响以后的实验。一般使用0℃冰水,10-15min, DNA样品足可达到实验要求。?核酸的纯化?得到核酸沉淀后,还要要去除盐类,有机剂等杂质。通常是用乙醇洗涤,由于乙醇易挥发,最后只剩下比较纯的核酸。Р2017/7/3Р南京农业大学生命科学学院Р10
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