amongDNAfragmentsseparatedbygelelectrophoresis.JMolBiol,1975,98(3):503-517.原始文献出处:(一)印迹技术1.具体步骤SouthernE1975年首次应用琼脂糖分离的DNA片段→变性为单链→将一张NC膜放在胶上,上面放吸水纸巾→利用毛细作用使胶中的DNA片段转移到NC膜上,使之成为固相化分子。载有DNA单链分子的NC膜可在杂交液与另一种DNA或RNA分子(探针)杂交,具有互补序列的RNA或DNA结合到存在于NC膜的DNA分子上,经检测分析可显现出杂交分子的区带。2.印迹(blotting)定义将存在于凝胶中的生物大分子转移(印迹)或直接放在固相化介质上并加以检测分析的技术。3.应用广泛用于DNA、RNA、蛋白质的检测4.发展电转移印迹技术、真空吸引转移印迹等(二)探针技术探针(probe)的概念是带有特殊可检测标记(放射性核素、生物素或荧光染料)的核酸片段,它具有特定的序列,能够与待测的核酸片段互补结合,因此可以用来检测核酸样品中是否存在某一特定的基因。探针的种类寡核苷酸探针基因组DNA探针cDNA探针RNA探针将探针与固定在NC膜上的DNA或RNA进行结合反应,探针的序列如与NC膜上的核酸序列相互补,就可结合到膜上的相应区带,经放射自显影或其他检测手段就可判断膜上是否有同源的核酸分子存在。探针技术的概念二、印迹技术的类别及应用(一)DNA印迹技术(Southernblotting)(二)RNA印迹技术(Northernblotting)(三)蛋白质的印迹分析(Westernblotting)(一)SouthernblottingM12转移缓冲液Whatman滤纸凝胶Whatman滤纸纸巾玻璃板重物支持物500g12与探针同源杂交的基因DNA片段基因组DNADNA酶切片段内切酶NC或尼龙膜NC膜或尼龙膜
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