对肿瘤细胞体外生长的抑制作用,可选择10~15种以上肿瘤细胞系(株)进行体外研究,受试药用5个或5个以上不同浓度,观察药物对细胞形态、细胞存活、细胞膜功能、生长曲线、克隆形成能力等指标的影响。每项指标各有其优缺点,因此,应根据实际情况将几项指标组合起来应用。Р体外研究方法Р一、体外培养肿瘤细胞的生长和增殖特性? 细胞生长是指细胞体积的增大,细胞增殖是指细胞数目的增多。体外培养的细胞生长增殖到一定密度时,则需进行传代(passage)。细胞每传一代后,一般要经历潜伏期、对数生长期和停滞期(平台期)3个阶段。Р体外研究方法Р* 在指数生长期,取细胞数的对数与培养时间作图,可得一条斜率向上的直线,故也称此期为对数生长期,约3~5 dР体外培养的肿瘤细胞按其生长方式可分为贴附生长型和悬浮生长型两大类:? 贴附生长型: 细胞在培养时能贴附在支持物表面生长,有时也称为贴壁生长。Р体外研究方法Р悬浮生长型: 细胞在体外培养时不需要附着于支持物而在悬浮状态下生长,如取自血、脾或骨髓的培养细胞、血白细胞等。Р二、MTT法(√√) ?? [基本原理]? MTT是一种溴化四氮唑, FW:414.3, 是能接受氢原子的染料。 MTT可进入细胞内,活细胞线粒体中脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲臢, 而死细胞则无此功能。甲臢的生成量通常与活细胞数成正比, 在一定波长下用酶标仪测定吸光度值(A), 即可定量测出细胞的存活率。РMTTР[试剂与器材]? 1.MTT溶液用生理盐水或PBS配制成5 mg/ml贮存液,在磁力搅拌机上搅拌30min使之完全溶解。用前通过0.22μm滤膜除菌和沉淀物,4℃避光保存,两周内有效。呈黄色,无沉淀。暂时不用,可冻存。? 2.含10%胎牛血清RPMI1640培养液,不含酚红指示剂;0.25%胰酶消化液;DMSO原液(分析纯),作为甲臢的溶解液。РMTT
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