固体颗粒作为细胞生长的载体,细胞固定在载体表面生长。? 体外培养法优点:工艺简单,易于控制,目前上市的单抗多用此法。? 体外培养法缺点:抗体浓度低,一般含量为200~500μg左右。Р二,为什么要制备腹水?Р2. 动物体内诱导法?(1)实体瘤法:? 将对数期细胞按(1~3)×107个/ml接种于小鼠背部皮下,多点注射,待肿瘤达到一定大小后可采血获得抗体,一般1~10mg/ml,缺点是采血量有限。?(2)腹水制备法:?腹水抗体的浓度达2~5 mg/ml,一般可以抽取5ml左右腹水。? 该法优点:操作简单、经济,是一般用途单克隆抗体制备的首选方法,一般用于生产科研或诊断用的单克隆抗体。Р三,腹水产生的原因:?1,杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔后,大量肿瘤细胞在腹腔中生长,分泌很多刺激性的因子,胶体渗透压升高,导致腹水产生。?2,杂交瘤细胞的生长对腹膜是个刺激,引起炎症反应导致腹膜上的毛细血管通透性增加,体液漏出,形成腹水。Р四,液体石蜡的作用:?1,免疫抑制剂,注射石蜡油(降植烷和不完全福氏佐剂) 可以降低小鼠的免疫力, 从而降低小鼠对接种的杂交瘤细胞的排斥反应;?2,石蜡(降植烷、不完全福氏佐剂)可以强烈刺激小鼠产生白细胞介素6(IL-6),IL-6是最重要、最主要的浆细胞(成熟的抗体分泌细胞)生长因子,因此注射上述几种物质都可以通过刺激IL-6的产生,为接种的杂交瘤细胞提供较好的生存环境并促进腹水的形成。Р注射液体石蜡注意事项:? 1,拿小鼠姿势正确,不要被咬伤。? 2,不要将针头对着其他人。? 3,石蜡不能注射到皮下。? 4,注射石蜡时要注意石蜡的量(0.5ml)。? 5,发现不同性别小鼠时要将其分开。? 6,注射完毕后要及时做好标记。? 7,发现缺水少食时应及时提醒添加。Р第二章,细胞的复苏?一,确定复苏的细胞数?二,制备适量的饲养细胞?三,细胞的复苏?四,细胞复苏的注意事项
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