蛭素在古代医书《神农本草经》中早有水蛭素的记载,为我国传统中药。中医认为它有破血、逐瘀、通经的功能。它是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。水蛭素的临床应用?预防外科手术后的静脉血栓形成?预防和治疗(阻断) 急性或慢性血管内凝血( DIC ) ?预防血栓溶解后再栓塞?预防经皮血管腔内形成术( PTCA )后的再狭窄?作为透析和体外循环中的抗凝剂?由于水蛭素具有重要开发价值,而水蛭的来源有限,故国内外医药界均着重研究通过基因工程获得重组水蛭素。?现国外一些大的生物技术公司对水蛭素己进入多方面的临床研究。有关水蛭素类多肽的专利,每年公布的数量至少在十多项以上。? 1998 年底重组水蛭素药物在德国正式上市, 1999 年英国批准上市,己注册的国家有美国、欧洲、澳大利亚、新西兰、南非等 I0多个国家。基因工程技术获取水蛭素?1、获得具有遗传信息的目的基因?2、选择基因载体获得重组 DNA ?3、将重组 DNA 分子导入宿主细胞?4、鉴定带有目的基因的克隆?5、目的基因的扩增及获得目的产物 1、获取目的基因?现已知水蛭素有 11 种类型,其中 3种具有抗凝血活性,它们分别命名为 HV1 、 VH2 和 VH3 。?天然水蛭素是酸性多肽,其一级结构中含有 6个半胱氨酸,形成 3对链内二硫键, 位于肽键 N端;另一特点是在 63 位酪氨酸处有硫酸酯化。水蛭素的核心环肽结构如下: ? 1986 年科学家从水蛭头部匀浆构建了水蛭素的 cDNA 文库。根据已测知的氨基酸序列,设计并合成基因探针,从水蛭素 cDNA 文库中分离出编码水蛭素的 cDNA 。?氨基酸密码子基因探针提取基因 2、选择基因载体获得重组 DNA ?在体外将含目的基因的 DNA 片段和具有自我复制功能、并带有选择标记的载体分子进行酶切连接,获得重组 DNA 分子。?可以作为载体的主要有质粒、噬菌体、黏粒、病毒载体等。