d ,观察菌落特征;将灭菌盖玻片插于平板上,置于 30℃恒温培养箱中培养 4d ,待菌丝铺满并已蔓延到玻片上后,将玻片取出于显微镜下观察其菌丝和孢子特征。 1.2.2.2基因组 DNA 提取 CTAB 法提取基因组 DNA ( 吴发红等, 2009 ),采用 rDNA-ITS 序列通用扩增引物 ITS1 、 ITS4 (张志华和洪葵, 2006 ): 5'-TGCGC-3' 和 5'-GCTTATTGATATGC-3' 。 PCR 反应体系 25.0 μ L,其中, 10× Taq Plus Re-action Buffer 2.5 μL, dNTPs (10μ mol/L )0.5 μL,引物(25μ mol/L )1.0 μ L,模板 DNA 2.0 μ L, Taq DNA 聚合酶( 2.5 U/μ L) 0.3 μ L,纯水 18.7 μ L 。扩增程序: 94℃预变性 5 min ;94℃1 min ,56℃1 min ,72℃1 min , 进行 35个循环; 72℃延伸 10 min 。 1.2.2.3 DN A 序列测定和系统发生学分析 ITS序列扩增产物经 PC R产物纯化试剂盒纯化后进行测序分析,测序结果与 NCB I的 GenBan k进行 BLAS T比对, 并利用 Clustal X和 MEGA 5.0 软件构建系统发育进化树。四、生物科技的发展正在以“结构基因组学→功能基因组学(蛋白质组学)→系统生物学(system biology) →合成生物学(synthetic biology) ”路径模式快速演进。某实验室拟对产活性物质 A的菌株进行发酵放大的研究,其总体技术路线如下, 请你从生物技术和生物工程专业发展趋势的角度评价下该技术路线。(25分) 生物合成途径中的关键基因进行了研究并在此基础上利用基因工程的技术手段对工程菌的屮产件状进行了改良,
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