粒群在暗室里室温下孵育15分钟放进微型台式离心机离心5分钟,速度为300g(或1500RPM,例如EPPENDORF5415)小心抽去上清液加入200微升反应液(ReagentB),混匀放进微型台式离心机离心5分钟,速度为300g(或1500RPM,例如EPPENDORF5415)小心抽去上清液加入200微升反应液(ReagentB),混匀即刻移取10微升在载玻片上压片在荧光显微镜下进行观察(每个视野计数200个细胞):激发波长488nm,散发波长530nm(细胞膜染色)或620nm(细胞核染色)或即刻进行细胞流式仪分析:波长488nm氩离子激光器,观察50000个细胞以上建立地形图或散点图以及直方图分析如下染色液(ReagentC)复染液(ReagentD)荧光染料异硫氰酸荧光素(FITC)碘化丙啶(Propidiumiodide;PI)荧光颜色绿色红色阳性意义早期细胞凋亡晚期细胞凋亡散发波长530575(使用phycoerythrin的信号检测)流式仪通道FL1FL2早期凋亡阳性染色阴性染色晚期凋亡阳性染色阳性染色正常细胞阴性阴性注意事项本产品为10次操作在整个操作过程中须戴手套,以防污染确保实验准确性,须收集所有悬浮和贴壁细胞避免使用EDTA、EGTA等钙离子螯合剂处理样品,否则将干扰检测孵育时,必须避免光照建议检测细胞量达106细胞数为佳用户可以根据情况,适度调整试剂用量建议细胞染色完成后,即刻进行荧光分析,不宜超过1小时细胞流式仪分析前,须混匀内容物细胞检测量不得少于10000个务必测试正常对照组检测时,须弥补电子补偿,以去除双重参数的光谱重叠正常样品会呈现少量凋亡和死亡细胞,作为检测本底可以使用细胞凋亡诱导剂喜树碱(Camptothecin)作为阳性对照告知流式仪技术员有关细胞类型本公司提供系列细胞凋亡检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定显色清晰
全文预览
