酚(分子量:139.11),蒸馏水溶解,全部转移至100mL容量瓶内,摇匀,配制成1.5mmol/L对硝基苯酚溶液。取6个30mL容量瓶,分别吸取1.5mmol/L对硝基苯酚溶液1mL、2mL、4mL、6mL、8mL、10mL依次加入容量瓶,蒸馏水定容,摇匀。即为0.05mmol/L、0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L、0.5mmol/L。②对硝基苯酚标准方程的测定取6支15mL刻度管、6支1mL刻度吸管,分别加入0.05mmol/L、0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L、0.5mmol/L对硝基苯酚溶液1.0mL,再加入2.0mL1mol/L的Na2CO3溶液和10mL的蒸馏水,室温放置5min后,摇匀。以蒸馏水作为空白对照,在400nm下测定吸光度A。以A为纵坐标,C为横坐标,制定标准曲线。(3)测定方法游离酶酶活力的测定:0.1mL适当稀释的酶液与0.9mL5mmol/LpNPG溶液(分别预热5分钟)混合后,于50℃下保温10min。10min后立即加入2mL1mol/LNa2CO3溶液终止反应后,再加入10mL的蒸馏水,摇匀。在400nm下测定吸光度。以0.1mL蒸馏水代替酶液作空白对照。(要做2~3个平行样,取平均值)固定化酶酶活力的测定:将游离酶酶活的测定方法中0.1mL适当稀释的酶液用0.1mL蒸馏水和一定质量的固定化酶来代替,其余步骤相同。(4)酶活力的计算一个β-葡萄糖苷酶酶活力单位定义为:每分钟水解生成1µmol对硝基苯酚所需要的酶量。计算公式如下:游离酶酶活力的计算:生成对硝基苯酚的量(µmol)β-葡萄糖苷酶酶活=(IU/mL)10min×0.1mL固定化酶活力的计算:生成对硝基苯酚的量(µmol)β-葡萄糖苷酶酶活=(IU/g)10min×称取固定化酶的质量(g)
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