完全有效,保证以满足后续实验需要 DNA 的量[7]. 蛋白酶K 消化裂解后进入 90Р℃灭活, 此阶段裂解液对修饰 DNA 及释放 DNA 进一步发挥作用。Р 3.3.2 DNA 洗涤 DNA 洗涤液使用前按要求加入无水乙醇,使其成为合格的 DNA 洗涤液,否则造成DNA 柱上流失,大大降低其浓度。 DNA 洗涤时将洗涤液静置时间应严格控制, 保证洗涤液与核酸有充分的反应时间,提高标本 DNA 洗涤效果。Р 3.3.3 DNA 洗脱洗脱液 pH 不合适,将会减少 DNA提取效率,应确保洗脱液 pH 值在 7.0~8.5 之间。为了提高 DNA 洗脱效率,可在加入洗脱液后在室温静置至少 3min 以上,肿瘤细胞偏少应 5min 以上,再按要求离心。加入洗脱液量可根据我们病理评估及基因检测要求量的结果适度加减,超过 200μl洗脱体积所得的 DNA 浓度会降低, 但 DNA 总量不会减少。建议活检小标本 DNA 洗脱液体积应小于 100μl.Р 4 DNA 定量Р Р 提取的 DNA 应经过定量以保证足够适量的DNA 含量用于下游突变检测。 DNA 提取后应立即进行 DNA 浓度测定,随后存储 DNA 样本。可利用分光光度计在 260nm 处光密度值和银光染料法DNA 总量检测,OD260nm/OD280nm比值可直观判断基因的纯度,一般值为 1.8~2.0 较好,该方法较简便,但无法评估可扩增的 DNA 片段和 PCR 抑制物。若DNA 含量的确不符合检测要求应终止进一步检测,以节约成本和时间。Р 综上所述, 在病理石蜡标本基因检测 DNA 提取中,我们应尽量了解每个步骤的作用以及学会如何控制石蜡标本 DNA 提取的关键点, 这是对石蜡标本基因检测的操必备要求,也是如何防止假阳性假阴性结果的出现而采取了质量保证措施,同时也是我们病理科开展基因检测项目前提[8].
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