cm、宽33cm、高10cm,底有细孔)供播种。РB2.4 消毒研钵。РB2.5 硅藻土或金刚砂(400~600目)。РB2.6 指示植物菜豆品种“monroe bean”,供试幼苗,要求在防虫温室培育,在单叶到一片复叶时使用。РB3 检测步骤Р 以生长试验为主,必要时进行指示植物反应、血清反应和电镜观察。РB3.1 生长试验РB3.1.1 取种样:原原种按种重1/10,最多不超过500粒;原种取500粒。РB3.1.2 播种:在防虫条件下播种和培育幼苗。种距约3~5cm。即于上述规格的塑料果盘中每行播10粒,10行,共播100粒/盘。其他盆则以此类推、培育温度不低于15℃,不高于28℃,以18~23℃为宜。РB3.1.3 观察记载:第一次于单叶展平时,记下症状明显的病苗数,第二次于第一复叶平展时,记下症状明显的病苗数,拔除病苗和健苗,留下可疑而未确定的苗。РB3.2 接种指示植物Р 取可疑苗的叶片少许,在消毒研钵中研成病汁,加金刚砂(或硅藻土)少许,常规接种菜豆“monroe bean”。观察指示植物接种叶的病斑或幼叶的系统症状,判断可疑苗是否有病毒病。РB3.3 琼脂双扩散血清反应Р 平皿中倾入熔化的培养基(NaN31%,SDS0.5%,琼脂0.8%,蒸馏水配制)。凝固后打二或四组孔,中央孔滴入抗血清,四周孔滴入待测植株的汁液。每克叶片加1mL水研磨,并加1mLSDS3%液处理,挤出汁液,即可加入平皿孔中测定(测定球状病毒时不用SDS处理)。平皿加盖,放25~37℃孵育1d。标品孔与中央孔(抗血清)之间出现沉淀线为阳性反应。РB3.4 电镜观察Р 切取一小块(1mm×3mm)叶片,放入一滴2%~3%的磷钨酸(PTA)液中,用玻棒捣碎叶组织,取液滴放在被有福尔马膜的铜网上,浮载30s,取出吸去多余的液体,即可在电镜下观察。如观察CMV,可用乙酸铀2%液染色。
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