测器)。Р电热恒温鼓风干燥箱。Р电子天平。Р超声波清洗器。Р超级恒温水浴。Р分析步骤Р色谱条件与系统适用性试验Р 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;检测波长:254nm;柱温:43℃;以乙腈-0.1mol/L醋酸钠溶液(用醋酸调节pH值至6.5)(7:93)为流动相A,以乙腈-水(4:1)为流动相B,按表A.1中的规定进行梯度洗脱。理论板数按L-羟脯氨酸计算应不低于4 000。Р流动相梯度表Р时间(分钟)Р流动相A(%)Р流动相B(%)Р0~11Р100→93Р0→7Р11~13.9Р93→88Р7→12Р13.9~14Р88→85Р12→15Р14~29Р85→66Р15→34Р29~30Р66→0Р34→100Р供试品溶液制备Р取本品0.25g,精密称定,置25mL量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液20mL,超声处理30分钟,放冷,加0.1mol/L盐酸溶液至刻度,摇匀。精密量取2mL,置5mL安瓿中,加盐酸2mL,熔封,150℃水解1小时,放冷,移至蒸发皿中,用水10mL分次洗涤,洗液并入蒸发皿中,蒸干,残渣加0.1mol/L盐酸溶液溶解,转移至25mL量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液定容至刻度,摇匀,即得。Р衍生化处理Р精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各5mL,分别置25mL量瓶中,加入0.1mol/L异硫氰酸苯酯(PITC)乙腈溶液2.5mL与1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5mL,摇匀,室温放置1小时后,加50%乙腈至刻度,摇匀。取溶液10mL,加正己烷10mL,振摇,放置10分钟,取下层溶液,滤过,取续滤液,即得。Р测定法Р分别精密量取衍生后的对照品溶液与供试品溶液各5μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,以外标法按峰面积计算,即得。Р结果计算Р (A.1)Р式中:РX ——供试品中氨基酸的含量,单位为克每百克(g/100g);
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