苯闪烁液 100 mlР2、器材Р①层析缸 1个Р②微量注射器(10 μl) 1只Р③Whatman#4滤纸 5×20 cmР④座标纸(方格) 1张Р⑤剪刀 1个Р⑥喉头喷雾器 1个Р⑦闪烁瓶 20个Р⑧镊子 2把Р⑨立柱铁架 1个Р⑩液体闪烁计数器 1台Р【操作步骤】Р1、裁取Whatman4#滤纸5×20 cm 1张。用铅笔按1 cm间隔画线,编号,并画一中线。Р原点Р2、点样用微量注射器吸取3H-胸腺嘧啶核苷和未标记胸腺嘧啶核苷按各2~3 μl点在原点处。Р3、展开采用上行法,先在层析缸内加入展开剂(本展开剂配方:醋酸乙酯:甲酸:水=60∶5∶35) 50 ml,盖好层析缸盖后待缸内空气为展开剂饱和后(约5分钟),将已点样滤纸悬于缸中,并使展开剂的液面浸在点样基线下1厘米处,开始计算时间,约120分钟后,展开剂前缘达到滤纸上端18 cm处。Р4、层析谱的放射性分布测量展开完毕后,取出滤纸条,吹干,将滤纸从中线剪开成两条,将有放射性的纸条从原点后1 cm处到展开剂前缘1 cm处按划线剪开成小窄条,按顺序将窄纸条放入闪烁瓶底部。加入0.4% PPO闪烁液5 ml,放入液体闪烁计数器内进行放射性测量。Р5、显色将含胸腺嘧啶核苷的另一纸条挂立,用喷雾器将半胱氨酸盐酸盐硫酸溶液喷在纸上,在75℃烘5分钟,胸腺嘧啶斑点呈粉红色。Р6、绘制层析谱图在方格座标纸上,以放射性(cpm)为纵座标,离原点距离为为横座标,绘出层析谱图。Р【放射化学纯度计算】Р以显色斑点对应的放射性峰的总cpm被整个纸条总cpm除,可求得百分率,即放射化学纯度。Р放射化学纯度(%)=Р【比移值(Rf)计算】Р量出原点至层析斑点(或放射性高峰点)的距离(dc)及原点至展开前缘的距离(ds)РRf =Р【测定仪器计数效率】Р任取一样品管加入3H-正烷标准源10 μl,再放入液闪计数仪器内测定cpm数。Р计数效率=
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