情况各异,所以这里只做略述。首先, 单克隆抗体与膜的结合优于多克隆抗体, 主要时由于多克隆抗体有很多不同的表面位点,而各位点与膜的最佳结合条件都有细微的差别, 毫无疑问就增加了优化难度。其次, 分子量越大, 蛋白越难结合到固相材料上。 2 )缓冲液大家最关心的可能就是希望获得一个性能优良的配方,包括缓冲液, 封闭液等等处理溶液配方。其实我也无法提供给你一个万用配方清单。因为不同的反应体系需要不同的配方来支持, 而不同机构的反应体系又有差异。想获”鱼”先学”渔”.。为了不误导大家, 我在下面涉及到配方的问题上,仅提供思路,具体配方请自己摸索。缓冲液的构成一般是: PBS (或其他缓冲体系) + 作用物质(针对某一特定问题) +PH 调整. 我在参考过以前的各种资料后, 个人意见为配方原则为宜简不宜繁, 根据自己的需要添加作用物质, 原来的很多需要添加的作用物质, 由于膜制造技术的改进已经不再需要。作用物质的情况大致罗列如下: 少量 NACL , 减少信号强度, 消假阳。有机醇(甲醇,异丙醇等) ,润湿膜,减少膜带有的静电,利于结合包被。个人不推荐,因制膜工艺改进。表面活性剂( TW20 , TX100 ) ,增加亲水力,可避免线条中空现象,也可增色。糖,保护剂,减缓老化速度,也可以增加亲水力同上。调 PH 到某个位置,可以消假阳。 4. 点样环境环境湿度对点膜过程非常重要。最佳湿度一般在 45-65% 。湿度过低, 膜上容易聚集静电荷, 点膜容易出现散点, 导致测试会出现疏水斑。湿度过高,膜上毛细作用加强,点膜容易引起 CT 线变宽甚至扩散。为了保证点样时膜湿度的均一性, 一般在点样前把膜放到该湿度条件下平衡一段时间。 5. 点样仪器与膜面情况的关系目前有两种点样方式, 划膜式和非接触点膜式. 非接触点膜式优于划膜式,进口划膜式优于国产划膜式。因划膜式为软管将抗体划到膜表面,
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