08临医《医学细胞生物学》教案

名齐冰 2006 ~2007 学年第二学期时间_07/4/5_ 节次_1-3 讲授内容纲要、要求及时间分配(附页) 课程名称细胞生物学授课专业及层次 2008 临床医学本科 1-2 班授课内容基因组 DNA 的提取学时数 3 教学目的掌握基因组 DNA 提取的原理及方法重点 DNA 提取的方法难点自学内容无使用教具离心机等实验器材相关学科知识细胞生物学教学法演示法、谈话法等讲授内容纲要、要求及时间分配一、人类外周血基因组 DNA 提取: (一) 原理: 1、对外周血淋巴细胞内 DNA 进行提取,首先要消化掉细胞膜和核膜,然后将与 DNA 结合的蛋白质分离并沉淀。 2、传统的 TLS 法提取 DNA 是通过 TLS ( 是一种强的表面活性剂) 处理淋巴细胞,迅速溶解细胞膜和核膜并使 DNA 和蛋白质分离,但此法操作繁琐且费时,现一般用试剂盒进行 DNA 进行提取。 3、试剂盒的原理应与 TLS 法相似, (二) 方法与步骤: 1、离心管中加入溶液Ⅰ 500 μl ,新鲜血液 100 μl ,立即振荡。 2、室温放置 10 分钟, 12000r 离心 5 分钟。吸去离心管中的液体( 注意不要将沉淀带出,) 3、离心管中加入溶液Ⅱ 1ml ,轻柔颠倒,室温 12000r 离心 2 分钟,去处上清。 4、离心管中加入溶液Ⅲ 500 μl ,轻微振荡 10s ,充分混合。 5、室温 12000r 离心 5 分钟,将上清移至新的离心管中。 6、在心离心管中加入等体积异丙醇 500 μl, 上下颠倒数次, 直至出现白色丝状 DNA 。 7、结果观察(三) 实验注意事项 1 、着重强调离心机使用时的注意事项,如:离心时需要配平,平衡后要对称放入; 2 、高速离心机和低速离心机的区别; 3 、离心时离心管的摆放方向(耳朵朝外)要一致, 4 、讲解移液枪的正确用法。 10分钟 5分钟 10分钟