血细胞P53基因表达检测——RT-PCR1P53基因P53基因命名该基因编码一种分子量为53kDa的蛋白质功能作用重要的抑癌基因,防止癌变细胞基因的修复功能RT-PCRRT-PCR(反转录PCR技术)RNA的反转录(reversetranscription)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。在GenBank中查找p53基因设计引物确定参数检测p53基因在血细胞中的表达反转录的引物五个主要问题基因表达的检测方法4基因表达的检测方法Ques5在蛋白质水平基因检测的方法在DNA水平在mrna水平Northern印记杂交RT-PCR.......ReverseTranscriptionPCRRNA提取cDNA反转录PCRNorthern印记杂交Northern印记杂交基因表达水平随机六核苷酸引物引导Oligo(dT)引导特异性引导7反转录Ques8反转录酶逆转录酶(reversetranscriptase)是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶,至少具有以下三种活性:(1)依赖RNA的DNA聚合酶活性:以RNA为模板合成cDNA第一条链;(2)Rnase水解活性:水解RNA:DNA杂合体中的RNA;(3)依赖DNA的DNA聚合酶活性:以第一条DNA链为模板合成互补的双链cDNA.反转录可用的引物010305Oligo(dT):是一种对mRNA特异的方法。因绝大多数真核细胞mRNA具有3’端Poly(A)尾,此引物与其配对,仅mRNA可被转录。随机六聚体引物:用此种方法时,体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板,PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的cDNA中96%来源于rRNA。特异性引物:用含目标RNA的互补序列的寡核苷酸作为引物,用此类引物仅产生所需要的cDNA,导致更为特异的PCR扩增。
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