菌荧光微球抗体检测试纸制备四、总结及创新性五、下步改进内容提要一、布病抗体检测试纸原理1942年发现镧系元素中的铕可吸收紫外、发出强烈的铕离子特征荧光;1979年芬兰Soini和Hemmia提出“时间分辨荧光免疫分析”理论;1983年提出以镧系元素标记的时间分辨荧光测量技术;2005年基蛋生物研制《超敏C反应蛋白荧光微球检测试剂》获得注册证书(苏食药监械生产许20050035号;2014年万孚生物研制心肌肌钙蛋白I(cTnI)荧光微球试剂,获得注册证书(粤食药监械(准)字2014第2400511号;2018年莱普生研制《布病荧光微球试剂》通过临床验证和行业标准立项。二、时间分辨荧光免疫层析技术纳米荧光微球的特点:荧光微球是一种含有稀土元素的聚苯乙烯球,显著降低背景信号提高敏感性;荧光微球表面羧基与标记物共价偶联,显著提高稳定性;荧光微球检测技术有极宽的stoke位移,可消除基质干扰,显著降低假阳性率。荧光定量检测试纸荧光免疫分析仪溯源与管理云平台产品技术原理双抗原夹心法荧光免疫层析法三、布鲁氏菌荧光微球抗体检测试纸制备人工提纯S-LPS抗原和NH半抗原S-LPS抗原印膜制备NH半抗原偶联BSA荧光微球标记抗原制备组装成时间分辨免疫荧光试纸卡S-LPS抗原印膜制备荧光微球标记抗原制备方法路线S-LPS抗原提纯及鉴定菌体与酚水处理液加热到66℃,混匀搅拌20min冷却离心,将上清液用甲醇醋酸钠溶液沉淀2h离心取上清,三氯乙酸处理离心取上清,进行透析、冻干,即是S-LPS提纯后S-LPS的SDS-PAGENH半抗原提纯菌体用超纯水清洗高压离心,将上清液与乙醇溶液4℃反应18h离心取上清,将上清液与乙醇溶液-20℃反应18h离心取沉淀,超纯水重悬后,核酸酶37℃反应18h蛋白酶25℃反应24h离心取上清,与乙醇混合后,-20℃反应18h离心取沉淀,超纯水重悬后,透析、冻干,即是NH
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