粒是闭合环状双链DNA分子,比病毒更简单。在霉菌、蓝藻、酵母和一些动植物细胞中也发现了质粒。Р一质粒载体(plasimid vectors)Р质粒的特点?(1)自主复制性。质粒含有自己的复制起始位点(Origin,简称ori),有些质粒具有独立的复制子结构(Replicon),因此,质粒DNA可以自主复制,形成少则几个多则成百上千个拷贝。?(2)可扩增性。在格兰氏阴性细菌中,质粒的复制一般有两种复制形式,即严紧型(Stringent)和松弛型(Relaxed)。Р质粒的复制类型:一种质粒在宿主细胞中存在的数目称为该质粒的拷贝数。根据拷贝数的多少将质粒分为两种复制型:“严紧型”质粒(stringent plasmid),拷贝数为1-5;“松弛型”质粒(relaxed plasmid),拷贝数为6-60。不过,即使是同一质粒,其拷贝数在不同的寄主细胞间也可能有很大的变化。Р严紧型质粒(Stringent):这类质粒的复制由细胞内DNA聚合酶Ⅲ介导,并被质粒上编码的蛋白因子正调控,由于这些蛋白因子极不稳定使得每个细胞只能复制少数几个质粒拷贝,一般把一个细胞内拷贝数少于5个的质粒称为严紧型质粒。Р松弛型质粒(Relaxed):这类质粒的复制需要半衰期较长的DNA聚合酶Ⅰ、RNA聚合酶及其他复制辅助蛋白因子,这类质粒在宿主细胞中一般可达到30~50个拷贝,所以称为松弛型质粒。Р质粒的氯霉素扩增:当宿主细胞进入生长后期,加入氯霉素可以抑制宿主细胞蛋白质的生物合成,阻断宿主菌的大部分代谢途径,松弛型质粒就能利用丰富的原料及能量进行复制,最终每个细胞就能累积上千个DNA分子,把这种操作称为质粒的氯霉素扩增。Р(3)可转移性。在移动基因mob、转移基因tra、顺式作用元件bom等因子的作用下,许多野生型质粒可以通过细胞的接合(conjugation)作用从一个宿主细胞转移到另一个宿主细胞中。
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