T于摇床洗膜4×5mins。14.封闭液稀释二抗(建议比例为1:3000~10000),膜在二抗中室温于摇床1hour(避光)。注:如果一抗稀释液中含有0.1-0.2%的Tween-20,则二抗稀释液也添加相同的Tween-20。如果使用Tween-20的同时添加0.01-0.02%的SDS于二抗稀释液中可以比较好的降低背景15.洗膜同13(避光)16.用PBS洗去膜上残留的Tween-20,接下来可直接进行扫描。实验的详细的操作流程、注意事项、问题解决请参见附件以及《分子克隆实验指南》。仪器的操作流程:1.在面板上打开仪器电源开关,再开启电脑,关机时相反。2.用软布或无尘纸蘸双蒸水将扫描平面的玻璃擦拭干净。3.将要扫描的胶或膜放到扫描平面上,记下坐标,扣上舱盖。4.双击软件图标,输入用户名、密码,进入主菜单。5.点击scan快捷键,选择要扫描的区域、介质、通道及合适的灵敏度、分辨率,开始扫描。6.扫描结束后对扫描结果进行分析。7.依次进行图象裁切、定道、定分子量标准、背景扣除等操作。8.根据需要输出图形或数据报告表格。七.软件使用培训以下是关于Odyssey配套软件的简要操作说明,便于初次操作的研究者能快速掌握如何使用软件进行扫描。关于进一步的如何使用软件对实验结果进行分析,请参见随机所带的英文原版使用手册。一、如何进行图像的扫描:1双击桌面上Odyssey的快捷方式图标打开软件出现软件的使用界面2点击工具栏中图标,建立一个新的case软件提示选择case的途径和名称,点击Browse,选择case存储的位置,并在name栏中输入case的名称,点击Done,软件提示将文件存储到相应的位置中点击确定,保存文件。3点击工具栏中图标,该图标在可以进行扫描时变为彩色状态系统提示输入用户名和密码,一般情况下用户名和密码均为user,点击OK,弹出扫描设置对话框,对扫描参数进行设置
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