血液制品人细小病毒B19污染情况调查及新型病毒灭活方法研究

19具有普遍易感性,对免疫力较低的患者具有潜在的致病威胁,献浆员含病毒的单个单位血浆有使整个血浆池污染的潜在危险。开发研制出一种新的病毒灭活工艺迫在眉睫,在众多灭活病毒机制中,短波紫外线对无包膜病毒的灭活优势凸显出来,填补了血液制品病毒灭活工艺的空白,有很好的应用前景,越来越引起人们的重视,也为我们提供了新的思路和方法。8血液制品人细小病毒B19污染情况调查及新型病毒灭活方法研究第一章原料血浆及血浆蛋白制品中人细小病毒B19DNA检测与分析供血者处于病毒感染窗口期而未能检出、病毒发生变异或因检测试剂的灵敏度不能达到100%均会造成检测假阴性结果。如供血者处于感染窗口期,虽然此时检测不到诊断标志物,但体内已存在病毒,其窗口期血液或血浆仍然具有感染性。目前,我国对原料血浆的病毒安全性检验的现行标准是采用ELISA法检测+原料血浆检疫期管理,用免疫学方法,检测的是病毒抗原或抗体,窗口期很长。而核酸检测技术是基于对病毒基因组特异核酸序列的扩增反应,灵敏度大大提高,使窗口期缩短。通常的扩增原理有PCR(多聚酶链反应),TMA(转录介导扩增)等,适用于大样本量血液筛查并能满足高灵敏度要求的扩增技术主要为荧光定量PCR等。荧光定量PCR在传统PCR原理基础上采用荧光标记的探针杂交或直接使用能和双链DNA结合的荧光素检测PCR扩增产物,在加入梯度浓度的内标或外标参照后,还可以进行定量检测。该方法实现了反应体系的全封闭和操作的全自动,不仅减少了污染,还提高了效率。B19病毒因其独特的特性,对现行的病毒灭活工艺具有较强的抵抗力。因此,加强原料血浆筛查以降低生产用原料血浆病毒含量是确保制品安全性的重要手段之一。荧光定量PCR技术具有操作简便、结果直观、重复性好、特异性强、能准确定量等优点。用实时荧光定量PCR方法,检测原料血浆中的人细小病毒B19DNA,分析人细小病毒B19在献浆员中的感染率。9