.翻译后修饰 7.蛋白质折叠 8.亲和力。蛋白质Р工程可用遗传学方法(基因定点突变、删除或添加编码序列)和化学方法(氨基酸侧链修饰、Р化学合成多肽)进行蛋白质改造。Р在基因水平进行改造:改变编码蛋白质的 DNA 序列比直接改造蛋白质要容易,DNA 序列改造Р完成后,可大量复制,大规模制备改造蛋白质。Р①基因突变:插入、删除、替换一个或多个氨基酸残基,来改变蛋白质抗原性、活性和稳Р 定性。比如葡萄糖异构酶(GI)在工业上应用广泛,通过对 GI 基因进行体外定点诱变,Р 是蛋白质结构更具刚性,从而提高了酶的热稳定性。Р②基因融合:将来源于不同蛋白质的结构域的编码基因进行拼接组装,克隆到表达载体中Р 融合表达。比如嵌合抗体和人缘化抗体的应用,由于鼠单克隆抗体被人免疫系统排斥,Р 而利用人抗体的恒定区替代鼠单克隆抗体的恒定区,这样它的免疫原性就显著下降,如Р 用于治疗结直肠癌的单抗 Mab17-1A;人源化抗体:将针对某种抗原的鼠源特异性抗体Р 的 CDR 基因代替人的 Ig 的 CDR 基因,所产生的抗体几乎为人源的,减少了单克隆抗体Р 的免疫原性。比如治疗脊髓性白血病的 anti-CD33 等,其免疫反应可以忽略不计。Р蛋白质水平改造:化学方法和生物化学法,弥补生物表达体系的不足。Р①化学方法修饰蛋白质侧链官能团:应用如:PEG 修饰:PEG 在体内可降解,无毒;通过Р 对蛋白质的 PEG 修饰可提高水溶性,降低蛋白免疫原性;提高热稳定性,抵抗蛋白酶的Р 降解,延长体内半衰期,使蛋白质在体内更稳定的发挥生物功能;PEG-干扰素、PEG-Р 生长激素等已经应用于临床。Р②化学交联的方法将药物、毒素、放射核素分子与抗体或细胞因子连接:可运用对相连的Р 荧光和放射性核素等分子物理追踪研究药物、毒素、抗体及细胞因子等分子的分子机制。Р 如用免疫荧光标记抗体研究抗体功能与作用、代谢路径。
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