MOBIO RNA PowerSoil® Total RNA Isolation Kit中文说明书

SR5重悬沉淀高有机物含量的土样获得的RNA沉淀可能难于重悬。45℃水浴加热RNA沉淀有助于重悬。用枪头搅动沉淀或涡旋也能辅助重悬。进入步骤17加样到column前必须充分重悬RNA沉淀。未能充分重悬RNA沉淀会减少RNA 吸附,降低其自然下流的速度,导致RNA损失。 Column冲洗洗脱 RNA Capture Column中液体只能通过重力流下,不能使用离心机或真空泵抽吸。使用RNase-Free DNase消化RNA 注意:只有RNase-FreeDNase才使用于本操作说明。RNases的存在会消化掉RNA。对于绝大多数类型土样,RNA PowerSoil?Total RNA Isolation Kit不存在DNA污染。但高有机物含量的土样, 仍有可能提取RNA的同时带有DNA污染。请把下文操作说明与DNase生产厂家的说明书结合,处理RNA。 a. 若一次处理RNA PowerSoil?Total RNA Isolation Kit得到的所有RNA,加入4单位的DNase,加入适当的DNase 缓冲液和水,定容至200μl。通常10X DNase消化缓冲液为含10mM CaCl2、10mM MgCl2的10mM Tris-HCl 缓冲液,pH7.5。 b. 37℃孵育30-45min。 c. 计入200μl酚/氯仿/异丙醇(pH6.5-8.0),涡旋混匀。室温孵育5min d. 10000g离心5min。 e. 小心转移上层液相到另一Tube管中。 f. 加入1/10体积的5M NaCl,2倍体积的100%乙醇,上下颠倒混匀。 g. -20℃孵育30min,10000g离心10min。 h. 弃去上清,晾干沉淀小球。 i. 使用与沉淀一样体积的SR7重悬小球。此时RNA可不用稀释直接用于RT-PCR等下游实验。更多实用技巧请参阅eibo/blog.htm