测定,葛根素是用30%乙醇溶解,流动相是甲醇-水(25:75),半年前的色谱峰对称系数为1.1,现在变成了1.45,峰明显变胖!为什么现在只要不是用流动相溶解,就会出现峰变形的情况呢?与我的仪器是否有关系,还是溶剂(比如甲醇)有关呢?Р一、葛根素和黄芩苷包括醋酸曲安耐德他们都是结构非常相似的三个化合物,所以一个出问题,所有的都会有相似的问题的。我觉得问题最大的可能还是在色谱柱的柱头。溶剂效应现象,柱子越细,进样量越大,目标化合物和流动相极性匹配度差异越大,问题越明显。如果你用的是超高压的话,会更明显。我在做HPLC/MS/MS的时候,用的都是2.1mm的柱子,基本上都要用流动相来溶解样品,否则绝大多数情况下都有溶剂效应。你如果用超高压HPLC这种溶解效应会很显著。这种问题没别的办法,只有改用流动相溶解。Р二、你上面提到的葛根素的测定要做一个对比实验:一个是纯溶剂溶解的,一个是流动相溶解的。如果两者有区别,那说明是溶剂效应问题,建议先用异丙醇清洗系统,如果溶剂效应还在,建议再换成20微升进样定量环,每次进10微升。满环进样还是有很明显的溶剂效应,工程师也没有跟好的办法。Р如果二者没有区别,那就不是溶剂效应问题。你半年前做的好好的,不代表这根柱子现在就必须一定得好好的,如果柱子使用时间长了,脏了,对称因子从1.1-1.45也是非常正常的。我不知道你做过对比实验没有?Р如果单纯是拖尾的问题,那很简单,你把柱子入口部分打开,将柱头脏的部分用一个特制的小铲取出来,再用C18填料(散装,最好是进口的,不限品牌)用乙腈调成糨糊状,将缺少填料部位填实(注意填料别弄的到处都是,影响密封效果),再装好,重新使用,就会恢复到以前的1.1的状态。如果塌陷的比较多,填完正常使用一两次,让高压将后填的填料压实,再重复填装一次。这样这根柱子还会继续使用很长时间。柱子柱效降低或者峰拖尾90%都是这个原因。
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