HPLC心O中；用HCI调pH4．0，HPLC H20定容至200 ml，4"C保存。РР12．其他试剂：HCL，HpLCHZO，生理盐水等。РР1．3试验方法РР1．3．1标本采集与处理РР所有病例及对照组均于早晨抽取空腹静脉血5ml，4"C静置2h，然后于4"C以 3000r／：min离心lOmin，吸取上层血清分装，每管50ul，立即置-80。C深低温冰箱 保存。标本采集与处理示意见图1．1。РРРР5РРРРРРРРРР资料和方法РРРI?清晨～空腹母取5llII全血РUР4℃静置静置2小时РРUРl 4℃以3湖t／：min离心10mj琢Р量}Р吸取上层血淆分装成每管50-JРРUРI立即置一簟℃冰箱保存，РРР图1．1标本采集与处理示意图，РР1．3．2血清样品处理?．Р．РР1．从．80℃深低温冰箱中取出血清样品，放置冰盒上融解；РР2．以10，000币m，4。C离心2分钟；РР3．每个芯片点需要血清3ul，将血清样品冰浴振荡30分钟并用2倍体积U9缓冲液 稀释；РР5．将9ul上述样品参加108ul相应的结合缓冲液中，使血清样品的总稀释倍数到达 约40倍，混匀，防止产生气泡。?．РР6．将处理好的血清样品上样到芯片上。РР1．3．3芯片的选择РР．常用芯片包括WCX-2(弱阳离子交换芯片)、SAX2(强阴离子交换芯片)、 IMAC．3．Ni(固定金属亲和外表芯片)和H4(疏水芯片)等化学修饰芯片。其中研究发 现【32-33]：化学修饰的WCX-2芯片，有弱阴型离子羧基结合其外表，通过与被分析 物外表正负电荷基团的相互作用而捕获蛋白，所得到的蛋白峰较多，蛋白别离效果 较好，且差异明显、稳定性强。本实验通过预实验验证上述芯片，结果现示WCX．2 芯片所得到的峰最多、蛋白别离效果最好、差异明显和稳定性强。预实验操作流程 (图1．2)。РРРР6
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